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淺析沃特世色譜柱平衡緩沖液的選擇

更新更新時(shí)間:2019-10-17

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     沃特世色譜柱是以高純度具有良好機(jī)械穩(wěn)定性的硅膠為基質(zhì),通過使用高純度鍵合試劑在硅膠上鍵合季銨強(qiáng)陰離子交換基團(tuán),具有季銨和苯基官能團(tuán)的混合化學(xué)結(jié)構(gòu)。這種強(qiáng)陰離子交換相與疏水相的混合模式可以為各種有機(jī)化合物如芳香族或脂肪族羧酸和磺酸等提供和高選擇性的分離。硅膠:球形, 高純度(金屬雜質(zhì)10ppm)
 
    沃特世色譜柱洗脫液的選擇
 
    陰離子交換色譜柱的選擇:
 
    離子交換色譜柱通常粗短,直徑和長(zhǎng)度比一般為1:10~1:50。
 
    沃特世色譜柱裝柱:
 
    1、色譜柱安裝要垂直。
 
    2、裝柱時(shí)要均勻平整,不能有氣泡。
 
    平衡緩沖液的選擇:
 
    平衡緩沖液是指裝柱后和上樣后用于平衡離子交換色譜柱的緩沖液。
 
    平衡緩沖液的離子強(qiáng)度和pH值要保證各個(gè)待分離物質(zhì)的穩(wěn)定,要使各個(gè)待分離物質(zhì)與離子交換劑有適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合,并盡量使待分離物質(zhì)和雜質(zhì)與離子交換劑的結(jié)合有較大的差別。
 
    沃特世色譜柱上樣:
 
    上樣方式有正上柱和反上柱。
 
    上樣時(shí)注意樣品液的離子強(qiáng)度和pH值,上樣量應(yīng)小于工作交換量。
 
    沃特世色譜柱洗脫:
 
    1、洗脫液的選擇:
 
    (1)保證所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的。
 
    (2)要使結(jié)合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫。
 
    (3)梯度范圍盡量小一些,以提高分辨率。
 
    2、洗脫方式:
 
    離子交換色譜一般采用梯度洗脫,通常有改變離子強(qiáng)度和改變pH值兩種洗脫方式。
 
    (1)改變離子強(qiáng)度的洗脫:
 
    在洗脫過程中逐步增大離子強(qiáng)度,從而使與離子交換劑結(jié)合的各個(gè)組分被洗脫下來。
 
    (2)改變pH值的洗脫:
 
    陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫,陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。
 
    由于pH值可能對(duì)蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響,一般采用改變離子強(qiáng)度進(jìn)行洗脫。

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