HPLC常見異常峰型

       上海連橋生物科技有限公司

液相色譜儀HPLC分析過程中，由于各種原因，經(jīng)常會出現(xiàn)一些異常峰形，嚴(yán)重影響對結(jié)果的分析，給實驗人員帶來很大的困擾。下面潤揚(yáng)儀器色譜小科介紹一些常見的峰形以及可能的原因：

1. 未出峰    可能的原因：

a. 未成功進(jìn)樣，或樣品未溶解進(jìn)溶劑中，或樣品分解變質(zhì)或樣品濃度太低；

b. 液相色譜儀器本身的問題：泵或者檢測器故障；

c. 流動相選擇不合適，如對于反相硅膠柱來說，若流動相極性太大，是沖不下來一些小極性的物質(zhì)的，物質(zhì)一直保留在柱子中,因而不出峰；

d. 檢測器不合適，如有些產(chǎn)品沒有紫外吸收或者吸收很弱，但是檢測還使用了UV檢測器；

2.平頭峰     可能的原因：

a. 樣品濃度過大或進(jìn)樣體積太大，這個也是大多數(shù)原因；

b. 液相色譜儀檢測器設(shè)置不正確；

3.負(fù)峰     可能的原因：

a. 流動相吸收本底值過高；

b. 進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣；

c. 樣品組分的吸收低于流動相；

d. 配制樣品的溶劑與流動相不一致；

4.肩峰     可能的原因:

a. 進(jìn)樣量過大，樣品濃度過高；

b. 保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞；

c. 保護(hù)拄或色譜柱污染或失效；

d. 色譜柱柱頭塌陷；

5.裂峰     可能的原因：

a. 溶劑效應(yīng)：溶解樣品用的溶劑和起始流動相極性相差太大；

b. 保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞；

c. 保護(hù)拄或色譜柱污染或失效；

d. 色譜柱柱頭塌陷；

6.鬼峰     可能的原因：

鬼峰（ghost peak）是在某個譜圖里出現(xiàn)，可能同樣的條件再做一次又不出現(xiàn)了，時有時無的峰。

a. 進(jìn)樣閥殘余峰，在每次進(jìn)完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統(tǒng)；

b. 樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預(yù)處理；

c. 流動相污染，更換新流動相（或者換品牌）；盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用,隔夜的流動相再次使用時要過濾；

d. 流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除；

7. 前伸峰     可能的原因：

a. 進(jìn)樣量或樣品濃度高；

b. 溶解樣品的溶劑比流動相極性強(qiáng)；

c. 保護(hù)拄或色譜柱污染或失效；

d. 流動相不合適，更換新流動相（調(diào)pH或換種類、比例等）；

8. 拖尾峰     可能的原因：

a. 進(jìn)樣量或樣品濃度高；

b. 流動相不合適，更換新流動相（調(diào)pH或換種類、比例等）；

c. 硅羥基作用：加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值，鈍化樣品；

d. 柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效：更換燒結(jié)不銹鋼，加在線過濾器,過濾樣品；

e. 色譜柱柱頭塌陷或柱效下降：更換色譜柱；

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